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制備單克隆抗體動(dòng)物的選擇與免疫
發(fā)布時(shí)間：2010-12-29
1．動(dòng)物的選擇純種BALB／C小鼠較溫順，離窩的活動(dòng)范圍小，體弱，食量及排污較小，一般環(huán)境潔凈的實(shí)驗(yàn)室均能飼養(yǎng)成活。目前開(kāi)展雜交瘤技術(shù)的實(shí)驗(yàn)室多選用純種BALB／C小鼠。
2．免疫方案免疫方案應(yīng)根據(jù)抗原的特性不同而定，選擇合適的免疫方案對(duì)細(xì)胞融合雜交的成功，并獲得高質(zhì)量的McAb至關(guān)重要。一般在融合前兩個(gè)月左右根據(jù)確立免疫方案開(kāi)始初次免疫。對(duì)抗原的要求是純度越高越好，尤其是對(duì)于初次免疫所用的抗原。如為細(xì)胞抗原，可取1．0X107個(gè)細(xì)胞作腹腔免疫。可溶性抗原需加*福氏佐劑并經(jīng)充分乳化。如為聚丙烯酰胺電泳純化的抗原，可將抗原所在的電泳條帶切下，研磨后直接用于動(dòng)物免疫。
（1）可溶性抗原免疫原性較弱，一般要加佐劑，半抗原應(yīng)先制備免疫原，再加佐劑。常用佐劑有福氏*佐劑、福氏不*佐劑，方法如下。
初次免疫抗原l～50pg加福氏*佐劑
皮下多點(diǎn)注射或脾內(nèi)注射
（一般0．8～1ml，0．2ml／點(diǎn)）
↓3周后
第2次免疫劑量同上，加福氏不*佐劑
皮下或腹腔內(nèi)注射
（腹腔內(nèi)內(nèi)注射，腹腔內(nèi)注射劑量不宜超過(guò)0．5m1）
↓3周后
第3次免疫劑量同上，不加佐劑，腹腔內(nèi)注射
（5～7d后采血測(cè)其效價(jià)）
↓2—3周
加強(qiáng)免疫，劑量50～500~g為宜
腹腔內(nèi)注射或靜脈內(nèi)注射
（靜脈內(nèi)注射）
↓3d后
取脾融合
目前，用于可溶性抗原（特別是一些弱抗原）的免疫方案也在不斷更新，如：①將可溶性抗原顆粒化或固相化，一方面增強(qiáng)了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗原的使用量。②改變抗原注入的途徑，基礎(chǔ)免疫可直接采用脾內(nèi)注射。③使用細(xì)胞因子作為佐劑，提高機(jī)體的免疫應(yīng)答水平，增強(qiáng)免疫細(xì)胞對(duì)抗原的反應(yīng)性。
（2）顆粒抗原免疫性強(qiáng)，不加佐劑就可獲得很好的免疫效果。以細(xì)胞性抗原為例，免疫時(shí)要求抗原量為（1～2）X107個(gè)細(xì)胞。
初次免疫1X107／0．5ml腹腔內(nèi)注射
↓2～3周后
第2次免疫lXl07／0．5ml腹腔內(nèi)注射
↓3周后
加強(qiáng)免疫（融合前3d）lXl07／0．5ml
腹腔內(nèi)注射或靜脈內(nèi)注射
取脾融合
免疫過(guò)程和方法與多克隆抗血清制備基本相同，因動(dòng)物、抗原形式、免疫途徑不同而異，以獲得價(jià)抗體為zui終目的。免疫間隔一般2—3周。一般被免疫動(dòng)物的血清抗體效價(jià)越高，融合后細(xì)胞產(chǎn)生價(jià)特異抗體的可能性越大，而且單克隆抗體的質(zhì)量（如抗體的濃度和親和力）也與免疫過(guò)程中小鼠血清抗體的效價(jià)和親和力密切相關(guān)。末次免疫后3～4d，可分離脾細(xì)胞融合。
2．免疫方案免疫方案應(yīng)根據(jù)抗原的特性不同而定，選擇合適的免疫方案對(duì)細(xì)胞融合雜交的成功，并獲得高質(zhì)量的McAb至關(guān)重要。一般在融合前兩個(gè)月左右根據(jù)確立免疫方案開(kāi)始初次免疫。對(duì)抗原的要求是純度越高越好，尤其是對(duì)于初次免疫所用的抗原。如為細(xì)胞抗原，可取1．0X107個(gè)細(xì)胞作腹腔免疫。可溶性抗原需加*福氏佐劑并經(jīng)充分乳化。如為聚丙烯酰胺電泳純化的抗原，可將抗原所在的電泳條帶切下，研磨后直接用于動(dòng)物免疫。
（1）可溶性抗原免疫原性較弱，一般要加佐劑，半抗原應(yīng)先制備免疫原，再加佐劑。常用佐劑有福氏*佐劑、福氏不*佐劑，方法如下。
初次免疫抗原l～50pg加福氏*佐劑
皮下多點(diǎn)注射或脾內(nèi)注射
（一般0．8～1ml，0．2ml／點(diǎn)）
↓3周后
第2次免疫劑量同上，加福氏不*佐劑
皮下或腹腔內(nèi)注射
（腹腔內(nèi)內(nèi)注射，腹腔內(nèi)注射劑量不宜超過(guò)0．5m1）
↓3周后
第3次免疫劑量同上，不加佐劑，腹腔內(nèi)注射
（5～7d后采血測(cè)其效價(jià)）
↓2—3周
加強(qiáng)免疫，劑量50～500~g為宜
腹腔內(nèi)注射或靜脈內(nèi)注射
（靜脈內(nèi)注射）
↓3d后
取脾融合
目前，用于可溶性抗原（特別是一些弱抗原）的免疫方案也在不斷更新，如：①將可溶性抗原顆粒化或固相化，一方面增強(qiáng)了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗原的使用量。②改變抗原注入的途徑，基礎(chǔ)免疫可直接采用脾內(nèi)注射。③使用細(xì)胞因子作為佐劑，提高機(jī)體的免疫應(yīng)答水平，增強(qiáng)免疫細(xì)胞對(duì)抗原的反應(yīng)性。
（2）顆粒抗原免疫性強(qiáng)，不加佐劑就可獲得很好的免疫效果。以細(xì)胞性抗原為例，免疫時(shí)要求抗原量為（1～2）X107個(gè)細(xì)胞。
初次免疫1X107／0．5ml腹腔內(nèi)注射
↓2～3周后
第2次免疫lXl07／0．5ml腹腔內(nèi)注射
↓3周后
加強(qiáng)免疫（融合前3d）lXl07／0．5ml
腹腔內(nèi)注射或靜脈內(nèi)注射
取脾融合
免疫過(guò)程和方法與多克隆抗血清制備基本相同，因動(dòng)物、抗原形式、免疫途徑不同而異，以獲得價(jià)抗體為zui終目的。免疫間隔一般2—3周。一般被免疫動(dòng)物的血清抗體效價(jià)越高，融合后細(xì)胞產(chǎn)生價(jià)特異抗體的可能性越大，而且單克隆抗體的質(zhì)量（如抗體的濃度和親和力）也與免疫過(guò)程中小鼠血清抗體的效價(jià)和親和力密切相關(guān)。末次免疫后3～4d，可分離脾細(xì)胞融合。