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蛋白印跡法檢測技術原理
發(fā)布時間:2011-1-19蛋白印跡法檢測技術(immunoblottingtest,IBT)亦稱酶聯(lián)免疫電轉移印斑技術(enzyme linked immunoelectrotransfer blotting,EITB),因與Southern早先建立的檢測核酸的印跡法——Southernblot(DNA印跡法)相類似,亦被稱為Westernblot。
Western印跡法是將蛋白質借高分辨率的PAGE電泳有效分離成許多蛋白區(qū)帶,分離后的蛋白帶經電轉移至一種固相支持體如硝酸纖維素膜(NC)膜上,然后以抗體為探針,與附著于固相支持體的靶蛋白所呈現(xiàn)的抗原表位發(fā)生特異性反應,結合于固相支持體的抗體可用多種2級免疫學試劑(如125I標記的A蛋白或抗免疫球蛋白,HRP或ALP耦聯(lián)的A蛋白或抗免疫球蛋白等)檢測。較常用的兩種電轉移法為:
①半干印跡,即凝膠與固相支持物夾在緩沖液浸濕的濾紙之間,然后通電10—30min;
②濕印跡,即凝膠與支持體夾心物浸入轉移緩沖液中進行電轉移,至少需45min以上。