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技術文章

間接血凝反應法ELlSA診斷日本血吸蟲病

發布時間:2011-2-23
  該法是以紅細胞為載體的抗原—抗體凝集反應。采用微孔型有機反應板,用凍干血凝抗原、被檢血清以生理鹽水作1;10、1:20、1:40稀釋,每孔加被檢血清0.05ml,再加致敏紅細胞抗原液l滴振蕩,靜置40-60min后觀察結果。如紅細胞呈顆粒凝結,不論是全部或部分均判為陽性。如紅細胞沉淀于孔底,也有新的發展。該法為血吸蟲免疫診斷的主要方法,與糞檢陽性符合率達95%一99%,假陽性為1.3%一3.3%,與其他寄生蟲的交叉反應除肺吸蟲外均較低。常規ELISA方法在抗原抗體檢測中敏感性高,特異性強,但費時,成本高。為此,近年來改進的ELISA有如下幾種。
  
 ?、倏焖?mdash;ELlSA。改進特點為用PVC薄膜代替聚苯乙烯微量反應板作載體;將1%可溶性血吸蟲卵抗原與尿素溶解性血吸蟲卵抗原等量相混合預吸附于薄膜上。該法主要以目視法判斷結果,整個操作流程僅需20min左右。
  
  ②斑點—ELlSA(dot-ELISA)是近年新發展的一種ELISA技術,選用對蛋白質有很強吸附能力的硝酸纖維素薄膜作固相載體,底物經酶促反應后形成有色沉淀物使薄膜著色,然后目測或用光密度掃描儀定量。dot-ELISA可用來檢測抗體,也可用來檢測抗原,由于該法檢測抗原時操作較其他免疫學試驗簡便,故目前多用于抗原檢測。
  
 ?、畚⒉ㄝ椛銭LISA(MWLELISA)。該法檢測全程僅需5min即可加底物顯色,判斷反應結果。急性期和慢性感染陽性檢出率分別達到93%和64%以上(顧啟章等,1999)。
  
 ?、苋焖貳LISA。不用分離血清,檢測30nfin即可完成。
  
 ?、荽胖?mdash;ELISA(MB-ELISA)。以磁珠作為固相載體,檢測日本血吸蟲的抗原。
  
 ?、轈ystatin—ELISA。應用Cystatin捕獲血吸蟲吐出物中的半胱氨酸蛋白酶,再進行ELISA試驗檢測日本血吸蟲病人血清中相應的特異抗體(黃躍龍等,2002)。

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