技術文章
免疫組化 免疫膠體金 免疫熒光檢測豬繁殖與呼吸綜合征
發布時間:2011-4-6①免疫組織化學技術。這是診斷該病較可靠的方法之一,可用于檢測PRRSV抗原的分布。Halbu,等(1994,1995)報道了檢測病豬肺臟內的PRRSV抗原的親和素-生物素-免疫過氧化物酶方法;經鼻內接種105.8TCID50ATCCVR-2386毒株于4頭3周齡不喂初乳的仔豬,感染后第4天或第9天撲殺,并應用建立的免疫組化技術檢測人工,結果肺,心、扁桃體、脾、淋巴結、胸腺組織檢測為PRRSV抗原陽性。Pol等(1991)使用免疫過氧化物酶染色檢測人工鼻內接種6日齡SPF仔豬的肺、脾組織的冰凍切片,結果抗原呈陽性。
②免疫膠體金技術(DIGFA)。Mager等(1993)使用特異性單抗SDOW-17建立了檢測PRRSV抗原的免疫金銀染色方法(1GSS),用106.2TCID50LHVA-92-1和104.6TCID50LHVA-92-2PRRSV毒株分別進行鼻內人工接種3周齡的仔豬,人工感染后第6天或第8天撲殺,結果在酒精固定、福爾馬林固定及冷凍保存的肺臟組織中檢測到PRRSV抗原,在感染后第4天、第6天、第8天用酒精固定的扁桃體、淋巴結、胸腺、腎臟等組織中檢測到抗原。
③免疫熒光抗體染色技術。Benfield等(1992)制備了針對PRRSV核衣殼蛋白的單克隆抗體,這種單抗能與北美洲和歐洲的45株分離株反應,表明這種單抗是針對這些分離株的保守抗原決定簇。應用異硫氰酸熒光素(FITC)標記,建立了免疫熒光抗體染色技術用于直接檢測仔豬肺組織中的抗原。有的直接采集小豬的肺泡巨噬細胞(PAM)進行培養,用病毒特異性熒光抗體進行診斷。
以上幾種病原檢測方法有的需要細胞培養,工作量大,周期長,有的需要做組織切片甚至熒光顯微鏡,不利于基層檢測單位推廣應用,因此在診斷上很少應用。