技術文章
核酸探針雜交技術檢測豬繁殖與呼吸綜合征
發布時間:2011-4-6核酸探針雜交技術。Sur等(1996)以PRRSV的RNA為模板,通過RT-PCR擴增ORF7中的433bp片段,應用地高辛標記方法制備PRRSV特異性cDNA探針,建立了檢測PRRSVRNA的原位雜交技術。
該方法可以在肺、淋巴組織、肺泡巨噬細胞(尸體剖檢后灌洗獲得)、淋巴集結、腎臟的感染細胞內檢測到PRRSVRNA,較免疫組化具有更高的敏感性和特異性,特別是檢測感染后期細胞內的PRRSV RNA。應用生物素標記方法制備互補于ORFlb(LV株)和ORF7(VR 2385株)的兩種寡核苷酸探針,建立了檢測福爾馬林固定肺和淋巴組織中PRRSVRNA的原位雜交技術(Park,et a1,1996),該技術有很好的敏感性,但操作比較煩瑣,在診斷上也較少應用。