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技術文章

免疫酶染色試驗、免疫熒光試驗診斷豬瘟

發布時間:2011-4-13
  免疫酶染色試驗
  
  用酶標抗體直接檢測病豬組織中的病毒抗原。感染豬瘟的腎臟皮質部細胞被染成深褐色。應用內含o.01%過氧化氫或o.01%疊氮鈉溶液的抑制內源性酶,取得較好效果
  
  。
  
  采病豬扁桃體、脾、腎、淋巴結等病樣做壓印片或冰凍切片,標本自然干燥后,在2%戊二醛和甲醛等量混合液中固定10rnin。干燥后,將標本浸入0.01%過氧化氫或0.01%疊氮鈉溶液的Tris-HCI緩沖液中,室溫下作用30rain。用pHL40.02mol/L磷酸鹽緩沖液漂洗5次,每次3min,然后風干。將標本置于濕盒內,滴加1:10酶標記抗體,37~C下3min:用pH7.40。02mol/L磷酸鹽緩沖液沖洗3~4次,每次2~3min,再用無水乙醇、二甲苯脫水,封片檢查。結果判定:用顯微鏡檢查,如細胞呈深褐色為陽性;黃色或五色則為陰性。豬瘟兔化弱毒接種的豬組織細胞漿呈微褐色,與強毒株感染有明顯區別。
  
  免疫熒光試驗
  
  可分為直接免疫熒光和間接免疫熒光試驗。
  
  組織直接免疫熒光試驗采集病變典型的可疑組織或臟器,用石蠟包埋后切片或冷凍后用冰凍切片機切成薄片,室溫下用丙酮固定lOmin并風干組織片,之后用PBS沖洗組織片,抗體孵育(間接熒光分兩步進行,直接熒光為一步),PBS再次沖洗組織片,風干后在熒光顯微鏡下觀察熒光染色結果。該方法優點:不需采集大量病變實質組織,操作簡單。缺點:特異性和敏感性低,主觀性強。
  
  間接免疫熒光試驗在病豬組織上滴加1:4抗豬瘟陽性血清,作用30mln后洗滌再加羊抗豬IgG熒光抗體,作用30min后,漂洗、干燥、鏡檢。優點:操作簡便,診斷迅速。缺點:成本昂貴,特異性差,主觀性強,需有經驗的檢驗員操作,以區分好非特異性染色。

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