制藥網
技術文章
PCR法檢測豬鏈球菌病
發布時間：2011-4-16
（1）PCR法Smith等針對豬鏈球菌主要致病菌株利用莢膜生物合成基因的DNA序列特性建立了血清型特異性PCR鑒定方法。他們設計了3對引物：
CPS2Jprimers5’-CAAACGCAAGGAATTACGGTATC-3’，
CPS1Iprimers5’-GAGTATCTAAAGAATGCCTATTG-3’
CPS9Hprimers5’-GGCGGTCTAGCAGAATGCTCG-3’，
利用CPS-J引物進行PCR鑒定，可以檢測出2型和1型或2型；利用CPSlI引物進行PCR鑒定，可以檢測出1型和14型；利用CPS9H引物進行尸CR鑒定，可以檢測出9型。
馬清霞、何孔旺、陸承平等根據相關文獻設計并合成引物，建立了能同時檢測豬鏈球菌2型（cps）及其重要毒力因子溶菌酶釋放蛋白（mrp）和細胞外因子（印f）的多重PCR方法。目的片段的大小分別885bp（mrp）、675bp（cps）和443bp（epf）。對參考菌株、人工攻毒病料和臨床收集病料的檢測結果顯示，該多重PCR法特異性強、敏感性高，可直接從臨床病料中檢測出豬鏈球菌2型i并能鑒定其毒力因子表型。
倪艷秀等（2002）根據豬鏈球菌2型的莢膜多糖抗原基因cps-j，合成1對可擴增長度為675bp目的片段的引物，對9株經玻片凝集試驗檢測為豬鏈球菌2型的菌株進行了檢測，均呈陽性；同時，用此法對88份正常豬的扁桃體樣品的細菌分離物進行了檢測，36份呈陽性；同時用玻片凝集試驗進行對照檢測，36份也呈陽性。此法不需進行細菌的純分離培養，即可用于豬鏈球菌2型的快速診斷以及流行病學調查，特異性強。
何孔旺等用PCR方法檢測2型豬鏈球菌兩種毒力因子（MRP和EF），其檢測的敏感度可達100個細菌。他們用建立的PCR對從病豬體內分離的菌株進行檢測，檢測的15株2型分離株中有13株MRP和EF，均呈陽性，為典型的高毒力表型菌株（MRP+EF+），其余1株為MRP+EF-，1株為MRP-EF-。
（2）豬鏈球菌做隨機擴增多態性DNA（RAPD）分型研究寧宏波等利用100條10聚核苷酸隨機引物對分離的20株豬鏈球菌做隨機擴增多態性DNA（RAPD）分型研究，有27條引物呈現良好的多態性和穩定性，產生穩定、復雜的指紋圖譜。通過SPASS10.0軟件分析了不同菌株之間的遺傳距離，把20株豬鏈球菌分成4個聚類群。從分子水平上確立了該病的流行病學調查方法，同時為該病的防治提供了理論依據。
（3）豬鏈球菌熒光PCR快速檢測方法由北京檢驗*和中國獸醫藥品監察所共同研制成功的豬鏈球菌熒光PCR快速檢測技術（2006），具有快速、敏感、特異、安全等顯著優點，此檢測技術將檢測時間縮短為1．5h。此方法的問世，為我國開展豬鏈球菌檢測提供了。該技術不僅可用于活豬檢測，還可用于豬肉及其產品的檢測。
同時，于新和等利用自制熒光抗體進行鏈球菌病的診斷，可在2～3h內對鏈球菌作出診斷，比直接鏡檢具有更好的特異性和敏感性。
CPS2Jprimers5’-CAAACGCAAGGAATTACGGTATC-3’，
CPS1Iprimers5’-GAGTATCTAAAGAATGCCTATTG-3’
CPS9Hprimers5’-GGCGGTCTAGCAGAATGCTCG-3’，
利用CPS-J引物進行PCR鑒定，可以檢測出2型和1型或2型；利用CPSlI引物進行PCR鑒定，可以檢測出1型和14型；利用CPS9H引物進行尸CR鑒定，可以檢測出9型。
馬清霞、何孔旺、陸承平等根據相關文獻設計并合成引物，建立了能同時檢測豬鏈球菌2型（cps）及其重要毒力因子溶菌酶釋放蛋白（mrp）和細胞外因子（印f）的多重PCR方法。目的片段的大小分別885bp（mrp）、675bp（cps）和443bp（epf）。對參考菌株、人工攻毒病料和臨床收集病料的檢測結果顯示，該多重PCR法特異性強、敏感性高，可直接從臨床病料中檢測出豬鏈球菌2型i并能鑒定其毒力因子表型。
倪艷秀等（2002）根據豬鏈球菌2型的莢膜多糖抗原基因cps-j，合成1對可擴增長度為675bp目的片段的引物，對9株經玻片凝集試驗檢測為豬鏈球菌2型的菌株進行了檢測，均呈陽性；同時，用此法對88份正常豬的扁桃體樣品的細菌分離物進行了檢測，36份呈陽性；同時用玻片凝集試驗進行對照檢測，36份也呈陽性。此法不需進行細菌的純分離培養，即可用于豬鏈球菌2型的快速診斷以及流行病學調查，特異性強。
何孔旺等用PCR方法檢測2型豬鏈球菌兩種毒力因子（MRP和EF），其檢測的敏感度可達100個細菌。他們用建立的PCR對從病豬體內分離的菌株進行檢測，檢測的15株2型分離株中有13株MRP和EF，均呈陽性，為典型的高毒力表型菌株（MRP+EF+），其余1株為MRP+EF-，1株為MRP-EF-。
（2）豬鏈球菌做隨機擴增多態性DNA（RAPD）分型研究寧宏波等利用100條10聚核苷酸隨機引物對分離的20株豬鏈球菌做隨機擴增多態性DNA（RAPD）分型研究，有27條引物呈現良好的多態性和穩定性，產生穩定、復雜的指紋圖譜。通過SPASS10.0軟件分析了不同菌株之間的遺傳距離，把20株豬鏈球菌分成4個聚類群。從分子水平上確立了該病的流行病學調查方法，同時為該病的防治提供了理論依據。
（3）豬鏈球菌熒光PCR快速檢測方法由北京檢驗*和中國獸醫藥品監察所共同研制成功的豬鏈球菌熒光PCR快速檢測技術（2006），具有快速、敏感、特異、安全等顯著優點，此檢測技術將檢測時間縮短為1．5h。此方法的問世，為我國開展豬鏈球菌檢測提供了。該技術不僅可用于活豬檢測，還可用于豬肉及其產品的檢測。
同時，于新和等利用自制熒光抗體進行鏈球菌病的診斷，可在2～3h內對鏈球菌作出診斷，比直接鏡檢具有更好的特異性和敏感性。