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技術(shù)文章

PCR拖尾及假陽性的原因及對策

發(fā)布時間:2011-11-21

拖尾

  現(xiàn)象:產(chǎn)物在凝膠上呈Smear狀態(tài)。

  原因:

  1.模板不純

  2.Buffer不合適

  3.退火溫度偏低

  4.酶量過多

  5.dNTP、Mg2+濃度偏高

  6.循環(huán)次數(shù)過多

  對策:

  1.純化模板

  2.更換Buffer

  3.適當提高退火溫度

  4.適量用酶

  5.適當降低dNTP和鎂離子的濃度

  6.減少循環(huán)次數(shù)

  

  假陽性

  現(xiàn)象:空白對照出現(xiàn)目的擴增產(chǎn)物

  原因:

  靶序列或擴增產(chǎn)物

  的交*污染

  對策:

  1.操作時應(yīng)小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或濺出離心管外;

  2.除酶及不能耐高溫的物質(zhì)外,所有試劑或器材均應(yīng)高壓消毒。所用離心管

  及加樣槍頭等均應(yīng)一次性使用。

  3.各種試劑*行分裝,然后低溫貯存

 

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