技術(shù)文章
PCR拖尾及假陽性的原因及對策
發(fā)布時間:2011-11-21拖尾
現(xiàn)象:產(chǎn)物在凝膠上呈Smear狀態(tài)。
原因:
1.模板不純
2.Buffer不合適
3.退火溫度偏低
4.酶量過多
5.dNTP、Mg2+濃度偏高
6.循環(huán)次數(shù)過多
對策:
1.純化模板
2.更換Buffer
3.適當提高退火溫度
4.適量用酶
5.適當降低dNTP和鎂離子的濃度
6.減少循環(huán)次數(shù)
假陽性
現(xiàn)象:空白對照出現(xiàn)目的擴增產(chǎn)物
原因:
靶序列或擴增產(chǎn)物
的交*污染
對策:
1.操作時應(yīng)小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或濺出離心管外;
2.除酶及不能耐高溫的物質(zhì)外,所有試劑或器材均應(yīng)高壓消毒。所用離心管
及加樣槍頭等均應(yīng)一次性使用。
3.各種試劑*行分裝,然后低溫貯存