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技術文章

鏈霉菌抗生物素蛋白―過氧化物酶法

發布時間:2014-5-8

ABC法雖然是一種很好的方法,但是在實際應用過程中.確實也存在許多問題,如親和  素中含有約?%的糖類,它可與組織中含糖基的物質起反應,造成背景著色。親和素的等電  點約為10左右。可帶較多的負電荷,纖維組織可帶較多的正電荷,這兩種電荷可互相吸引,造成背景著色。親和素中有4個結合點,其中一半與連接抗體結合,另一半與復合物結合,如此可降低其敏感性。

 

    為解決和克服存在的問題,20世紀90年代初提出了用鏈霉親和素(streptavidin)替代ABC法中的親和素―生物素復合物,形成鏈霉菌抗生物素蛋白 ―過氧化物酶法(streptavidin-peroxidasemethod。SP法)。鏈霉親和素是從鏈霉菌中分離出的一種蛋白,含有四個亞基,每個亞基均具有與生物素親和力*的結合點。

 

    鏈霉親和素的四個亞基可以全部和二抗上的生物素結合,故又稱鏈霉菌抗生物素蛋白,它對組織穿透性強,反應速度快。鏈霉親和素的等電點為5.5~6.7,接近中性,所帶的負電荷少,不容易與組織中的正電荷發生相互吸引,因而可降低背景著色。此外,鏈霉親和素不含糖基,不存在與組織中含糖基類物質起反應的現象。該放大系統不含生物素,可以免除由內源性生物素所造成的背景著色,因此背景清晰,無非特異性染色,陽性反應物突出,明顯易辨。從某種意義上講,SP法比ABC法的敏感性至少高一倍以上。由于它的敏感性強,效果好,因此更受研究者歡迎。

免疫組織化學SP法原理示意圖

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