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問： 請問大家提取酵母的總RNA都用什么方法？有好用的試劑盒嗎？酵母總RNA提取應該注意什么？

答：使用熱酚法抽提酵母RNA,很好用，至今沒有失敗過。

(1)  將酵母細胞培養在3ml選擇性培養基中，30℃過夜旋轉培養。

(2)  稀釋過夜培養的菌液，重新在10ml培養基中培養細胞。

(3)  OD600達到1.0時，收菌，4000rpm/min離心5min,棄培養基。

(4)  將細胞懸浮于400μl AE緩沖液（50mM Sodium Acetate,10mM EDTA 調整pH值至5.2）。

(5)  加入1/10體積的10% SDS，充分混合。 

(6)  加入等體積在65℃預熱的酸性酚（pH4.5），混合。

(7)  65℃加熱5min，冰上放置10min。

(8)  在室溫下8000rpm/min離心10min。

(9)  取水相,加入等體積的酚/氯仿/異戊醇（25∶24∶1），10000rpm/min離心8min。

(10)  取水相，加入等體積氯仿/異戊醇（49∶1）10000rpm/min離心8min。

(11)  加入1/10體積3M pH5.2的醋酸鈉，2.5倍體積的純乙醇，-20℃過夜沉淀。

(12)  沉淀樣品于4℃離心5min，去除液體。

(13)  在冰上干燥RNA（放置15min），zui后用適量DEPC水溶解RNA。