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1、將無菌棉試子蘸取無菌生理鹽水，在每只拖鞋鞋面與腳趾接觸處5cm×5cm面積上，有順序地均勻涂抹3次（一雙鞋鞋為一份樣品）后，用滅菌剪刀將棉試子手執部分剪斷，將棉試子放入10mL裝有玻璃珠的無菌鹽水管中。

 

2、將盛有棉試子的鹽水管在手心用力震蕩100次，再用帶橡皮乳頭的1mL滅菌吸管反復吹吸50次，使霉孢子充分散開。此液為1：10稀釋液。

 

3、用滅菌吸管吸取1:10檢液2ML，分別注入到2個滅菌平皿內,每皿1ML。令取1ML注入9ML加有玻璃珠的滅菌鹽水管中，換一支1ML滅菌吸管吸吹5次，此液1:100稀釋液。

 

4、按上述操作順序作10倍稀釋,每稀釋一次,換一支1ML滅菌吸管,根據樣品的污染情況,選擇3個合適的稀釋度。

 

  5、將溶化并冷卻至45℃左右的培養基注入滅菌的平皿中,待瓊脂凝固后,倒置于25～28 ℃溫箱中，3天后開始觀察，共培養觀察一周。

 

  6、計算方法:通常選擇菌落數在30～100之間的平皿進行計數,同稀釋度的兩個平皿的菌落平均數乘以稀釋倍數，即為每毫升檢樣中所含真菌數。若有兩個稀釋度的菌落數皆在規定范圍之間或三個稀釋度皆不在此范圍時,應參照細菌總數的報告方式報告。

   

7、結果報告：              m=n×k

     m-真菌菌落數，cfu/50cm2（一雙拖鞋涂抹面積）

           n-每皿的平均真菌菌落數；

           k-稀釋倍數；