制藥網(wǎng)
技術(shù)文章
抗體保存指南
發(fā)布時(shí)間：2016-10-251.保存溫度和條件
很多抗體的保存條件是分裝成小包裝凍存于 -20 °C 或 -80 °C。分裝能使凍融引起的損失減到zui小，同時(shí)可避免多次在一個(gè)管內(nèi)取樣
而由槍頭引入的污染。分裝凍存的抗體，融解一次后剩余抗體應(yīng)保存于 4 °C。收到抗體后，應(yīng) 10000g 離心20 秒，使管口螺紋內(nèi)的抗體溶液全部離心至管底，用低蛋白吸附性的微量離心管分裝。分裝量的多少取決于每次試驗(yàn)的使用量。分裝量不能少于 10 μl；分裝量越
少，由于蒸發(fā)和吸附于管內(nèi)壁而引起的損失會(huì)越大。
除了腹水液含蛋白酶應(yīng)立即凍存外，大多數(shù)抗體接收后可在 4 °C 保存一至兩周，隨后可凍存以長(zhǎng)期保存。同樣，應(yīng)按照說(shuō)明書(shū)推薦的條件進(jìn)行保存。
2.其他特殊情況
酶聯(lián)抗體不應(yīng)凍存，4 °C 可保證穩(wěn)定。凍融會(huì)降低酶的活性，同時(shí)影響抗體的吸附能力。
共軛標(biāo)記的抗體，無(wú)論是標(biāo)記的熒光染料、酶還是生物素，都應(yīng)保存于深色的管內(nèi)并包裹上鋁箔。如果暴露在光線下可能會(huì)減弱共軛標(biāo)記物的活性。熒光標(biāo)記物尤其容易受到光漂白作用，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中均應(yīng)避光。
免疫球蛋白 G3 同種型抗體凍融后易形成聚合物，因此應(yīng)一直保存于 4 °C。
3.用疊氮化防止污染
為防止微生物污染，在抗體溶液中應(yīng)加入*，終濃度為 0.02%（質(zhì)量百分比）。
什么時(shí)候不能用疊氮化納？
如果用抗體標(biāo)記活細(xì)胞，或用于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，確保所用制劑中不含*。這種抗生素對(duì)大多數(shù)有機(jī)體都有毒性：會(huì)阻斷細(xì)胞色素電子傳遞系統(tǒng)的信號(hào)。*會(huì)干擾胺基的共軛標(biāo)記，應(yīng)在進(jìn)行標(biāo)記之前將其除去。標(biāo)記后抗體可保存于疊氮化納，也可用不含胺基的硫柳汞
替代。
*可用透析或凝膠過(guò)濾法從抗體溶液中除去。免疫球蛋白 G 的分子量是 150,000 道爾頓（免疫球蛋白M 的分子量是 600,000 道爾頓），*的分子量是 65 道爾頓。使用 14000 道爾頓的微量透析裝置，隨著*的擴(kuò)散，抗體將保留。將帶有燒杯的磁力攪拌器置于 4 °C 攪拌透析裝置 6 小時(shí),每毫升抗體溶液要用至少 1 升的 PBS。更換 2 次 PBS，每次均攪拌至少 6 小時(shí)。如果可以的話(huà)，所有材料均要求無(wú)菌，所有溶液都應(yīng)無(wú)菌配制。
4.凍存/復(fù)蘇的損失
反復(fù)凍融可使抗體變性，使其形成聚合物而降低了抗體結(jié)合能力。大多數(shù)抗體在 -20 °C 保存就足夠了，沒(méi)有必要置于 -80 °C 保存。千萬(wàn)不要使用無(wú)霜的冰箱。反復(fù)凍融能減少霜的形成，但這正是應(yīng)該避免的。同理，抗體應(yīng)該放置于冰箱中溫度變化zui小的部位，如應(yīng)放置于冰箱格里，而不應(yīng)放置于冰箱門(mén)上。
一些研究者為防止反復(fù)凍融的損失，在抗體中加入終濃度為 50% 的甘油作為抗凍劑。甘油可以將冰點(diǎn)降低至-20 °C 以下。
由于-80 °C 低于甘油的冰點(diǎn)，所以加了甘油的溶液不應(yīng)保存于 -80 °C。注意，甘油可能會(huì)被細(xì)菌污染。如果要加入甘油或其他防凍劑，應(yīng)注意無(wú)菌處理。稀釋至工作濃度的抗體不要在 4 °C 保存超過(guò)一天時(shí)間。通常蛋白質(zhì)在較高濃度保存時(shí)不易發(fā)生降解，理想濃度為 1 mg/ml或更高，因?yàn)榭贵w溶液中包含了如牛血清白蛋白等蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑。加入的蛋白可吸附于管壁從而使抗體的損失減到zui小。對(duì)用于聚合的抗體，不應(yīng)加入蛋白穩(wěn)定劑，因?yàn)槠淇赡軙?huì)與抗體競(jìng)爭(zhēng)而降低抗體的聚合活性。