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技術(shù)文章

實驗二十七 大腸桿菌生長曲線測定

發(fā)布時間:2010-4-2

一、基本原理
  一定量的微生物,接種在適合的新鮮液體培養(yǎng)基中,在適宜的溫度下培養(yǎng),以菌數(shù)的對數(shù)作縱坐標,生長時間作橫坐標,做出的曲線叫生長曲線。一般可分為延遲期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個時期。不同的微生物有不同的生長曲線,同一種微生物在不同的培養(yǎng)條件下,其生長曲線也不一樣。因此,測定微生物的生長曲線對于了解和掌握微生物的生長規(guī)律是很有幫助的。
  測定微生物生長曲線的方法很多,有血球計數(shù)法、平板菌落計數(shù)法、稱重法、比濁法等。本實驗采用比濁法測定,由于細菌懸液的濃度與混濁度成正比,因此,可利用光電比色計測定菌懸液的光密度來推知菌液的濃度,并將所測得的光密度值(OD值)與其對應的培養(yǎng)時間作圖,即可繪出該菌在一定條件下的生長曲線。現(xiàn)已有直接用試管就可以測定OD值的光電比色計(圖Ⅶ-10),只要接種一支試管,定期用它測定,便可做出該菌的生長曲線。
二、器材
  培養(yǎng)18—20小時的大腸桿菌培養(yǎng)液,盛有5ml肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的大試管12支;
  72型或72.1型分光光度計,自控水浴振蕩器或搖床,無菌吸管等。
三、操作步驟
  1.編號
  取11支盛有肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的大試管,用記號筆標明培養(yǎng)時間,即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20小時。
  2.接種
  用1ml無菌吸管,每次準確地吸取0.2ml大腸桿菌培養(yǎng)液,分別接種到已編號的11支肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基大試管中,接種后振蕩,使菌體混勻。
  3.培養(yǎng)
  將接種后的11支試管置于自控水浴振蕩器或搖床上,37℃振蕩培養(yǎng)。分別在0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20小時將編號為對應時間的試管取出,立即放冰箱中貯存,zui后一同比濁測定光密度值。
  4.比濁測定
  以未接種的肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作空白對照,選用540—560nm波長進行光電比濁測定。從zui稀濃度的菌懸液開始依次進行測定,對濃度大的菌懸液用未接種的肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基適當稀釋后測定,使其光密度值在0.1—0.65以內(nèi),記錄OD值時,注意乘上所稀釋的倍數(shù)。
四、實驗報告
 

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