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熒光抗體的制備
發布時間:2010-5-2熒光抗體是將抗體與熒光素結合而形成的偶聯物
(一)抗體
用于熒光素標記的抗體要求特異性強、純度高、效價滿意,瓊脂雙向擴散效價不低于1:20(稀釋抗體)或環狀沉淀實驗效價高于1:4000(稀釋抗原)。一般是特異性抗血清或用抗(人或其他動物)Ig的免疫血清提純的IgG,或相應的單克隆抗體都可用于熒光素標記。
(二)熒光素
熒光素是一種能夠吸收激發光的能量而產生熒光,并能作為染料使用的有機化合物。適用于抗體標記的熒光素須具備以下條件:
1、具有能與蛋白質分子形成穩定共價鍵結合的化學基團,或易于轉變為此類基團而不破壞其熒光結構。
2、熒光效率高,與蛋白質結合的需要量很少。
3、與抗體或抗原結合后,應不影響其免疫學特異性。
4、偶聯物產生的熒光顏色與背景組織的自發熒光對比鮮明、清晰,容易判斷。
5、熒光素與蛋白質結合的方法簡便、快速,游離的熒光素及其降解產物容易去除。
6、在一般儲存條件下,其結合物的性能穩定,可保存使用較長時間。