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以phenol/chloroform 進?DNA 萃取
發布時間：2010-7-7儀器用具：微?離心機
藥品試劑：
Plasmid DNA 酵解產物： #1 （pBlueGus/HindIII）, #2 （pBlueGus/BamHI）；Phenol/chloroform/isoamyl alcohol （25:24:1） 以下簡稱為PCI；Chloroform/isoamyl alcohol （24:1） 以下簡稱為CI；3 M NaOAc （醋酸鈉pH 5.2）；純酒?及70%酒?
方法步驟：
◆ 注意！進?這一部份實驗的前，請先確定pBlueGus/HindIII 與pBlueGus/BamHI 兩者的酵解反應?已經*。
1） 于酵解反應 #1 與 #2 的微?離心管分別加入182 μL 去離子水。
2） 以200 μL PCI 萃取一次，亦即加入PCI 后，以Vortex 震蕩混合，并在室溫離心3 min。
3） 以微?移液器P200 將上層液移至新的微?離心管。
4） 加入等體積的CI，以Vortex 充分震蕩混合，并在室溫離心3 min。
5） 以微?移液器P200 將上層液移至新的微?離心管。
6） 加入0.1 倍體積的3 M NaOAc （pH 5.2） 及2.5 倍體積酒?。
7） 置于 -20℃過夜，或于 -80℃放置30 min，以?沉淀DNA。
隔天：
1） 自?凍柜取出微?離心管，以14,000 rpm 離心10 min。
?? 注意： 請?用這一段時間參照『基本操作技術』所描述的步驟準備一片1.2%洋菜膠體。 Ethidium bromide 是一種強?致癌物質，嚴禁戴著手套到處?摸！
2） 小心地倒出上清液。
3） 徐徐加入0.5 mL的70%酒? （預先放在 -20℃預?）。小心?要動到DNA?淀。
4） 以14,000 rpm 低溫離心5 min 的后，倒去上清液，并將微?離心管倒置于一張干凈的衛生紙上30 min，以?風干DNA。也可以用SpeedVac 干燥DNA，但應小心處?，以免DNA 沉淀???。
5） 以10 μL dH2O/DEPC溶解DNA。
6） 依照下表，自pBlueGus/BamHI 與pBlueGus/HindIII 各取1 μL DNA 以洋菜膠體電泳進?分析，并估算其濃?。
?? DNA 濃?的估算請以 ??DNA/HindIII ?為參考值。