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結合血清抗體的噬菌體展示肽的選擇
發布時間：2010-8-2當用血清樣本篩選噬菌體文庫時，能有高濃度抗體進行淘洗。但是，血清中某個特定DS-Ab拷貝數可能很少。況且，每輪淘洗所采用的靈敏度域值可會嚴重影響對DS-Ab配體的選擇。同時還要考慮，進行多輪淘洗時，不同配體-抗體對之間的競爭可能會使所感興趣的配體丟失。
有多種方法可用血清淘洗噬菌體文庫。為了取得zui高比例的血清抗體，我們利用了磁性微珠所具有的龐大衣殼表面。通過使用次級抗體，可將血清抗體定位在微珠表面，就此避免了直接包被過程中可能發生的部分變性。對這個實驗方案的改變調整，涉及將血清和文庫進行預孵育，再用包被有抗人抗體的微珠進行捕捉。
選擇策略
用血清淘洗噬菌體文庫，可選擇到一組可結合血清中數目眾多的抗體的大規模多肽文庫。因而很必要的是，篩選策略要包括一種方法以能夠區分樣本中識別DS-Ab的配體和識別無關抗體的配體。與DS-Ab結合的多肽（DS-多肽）通常只占多肽文庫中的很小部分。一種能選擇到這一小群的有效方法，就是富集不同陽性血清抗體所識別的配體；因為在這個共同亞群之中，DS-肽出現的頻率是相當高的。
該陽性選擇可通過兩種可行的策略來實現：序貫選擇和平行選擇。這兩種策略的基本實驗方案相同，但操作順序則截然相反。
序貫選擇
在序貫選擇中，噬菌體文庫是用陽性血清淘洗的。淘洗所得的噬菌體群再對不同的陽性血清進行淘洗，如此反復。這個過程可以用不同的血清按照不同的次序進行。為了保持文庫的復雜度，限制淘洗輪次（通常不超過3次）是一個恰當方法。
噬菌體文庫可以根據其與陽性血清和陰性血清的ELISA反應活性來評價。從那些表現出zui感興趣的反應特征的噬菌體文庫中挑選克隆，再逐個測試它們與陽性血清和陰性血清的反應活性。
平行選擇
在這種情況下，同一噬菌體文庫同時用各種不同的陽性血清和陰性血清進行淘洗。這個操作使得針對每份血清都可產生一個結合此血清中抗體的噬菌體集合。此后，根據下節描述的方法，分離那些自陽性血清篩選的噬菌體池中存在的特異性配體，從中鑒定出DS-多肽。