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【微課堂】泰林壓力蒸汽滅菌生物指示劑芽孢計數方法
發布時間：2024-3-22
《藥品GMP指南》生物指示劑的應用中指出，實驗室在接收商品化生物指示劑時，應進行微生物數量測定。
那么壓力蒸汽滅菌生物指示劑的總芽孢數是如何確定的呢？接下來為大家分享泰林壓力蒸汽滅菌生物指示劑的芽孢計數方法（121℃滅菌生物指示劑均選用嗜熱脂肪地芽孢桿菌 Geobacillus stearothermoρhilus ATCC7953）。
隨機抽取需檢驗批次生物指示劑4片（支）與相關物品一并放入生物安全柜中，用酒精棉對指示劑初級包裝進行擦拭，通風15min以上，后續操作如下：
注意：物料準備過程中，切勿使用紫外照射生物指示劑，可能會導致計數結果偏低。
將生物指示劑轉移至生物安全柜內，取出載體，加入到含3~4顆4mm~6mm玻璃珠和3mL無菌水的試管中，置于渦旋混勻儀上充分振蕩，將試管中載體打散成纖維狀后，再加入7mL無菌水，制成均一的菌懸液，該試管記為10-1（同步平行4片）。
將懸液式生物指示劑（直管式，規格：0.3mL/支），用直管切割器打開置于含9.7mL無菌水的試管中，置于渦旋振蕩儀上混勻，該試管記為10-1。
將上述10-1試管放置于95℃～100℃恒溫水浴鍋中熱激活15min，熱激活結束后立即放入 0℃～4℃冰水混合浴中迅速冷卻至室溫。
注：根據生物指示劑總芽孢數適當調整稀釋級，建議最終稀釋芽孢數在30~300cfu/mL。
總芽孢數cfu/片（支）=平均菌落數×稀釋倍數
嗜熱脂肪地芽孢桿菌（Geobacillus stearothermoρhilus）ATCC7953菌落形態呈米黃色、表面光滑、不透明圓形，菌落生長狀態良好，單一，無雜菌。總芽孢數結果應在產品標定值的50%～300%范圍內。
★切勿將生物指示劑進行紫外照射消毒，建議對初級包裝進行擦拭。
★應按2020年版《中國藥典》要求，選擇無菌水作為稀釋液。
★吸取含紙質載體的菌液時，避免纖維堵槍頭，導致移液不準確。
★建議以單片（支）生物指示劑的形式進行計數，確保每片（支）生物指示劑計數結果均符合要求。
★建議使用玻璃珠（4mm~6mm）對紙質載體進行打散處理。
★芽孢計數過程中必須進行熱激活處理：溫度95℃~100℃，時間15min