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什么是顯微鏡的焦深？

發布時間：2024-10-6

焦深

    焦深也稱為焦點的深度，當焦點對準樣本的某一點時，不僅看清楚的是這一點，而且它的上下兩側也能同時看清楚，看到的物體不僅僅是一個平面，而且還看到有一定的厚度，這個清晰的厚度部分即是焦深。焦深的計算公式為：

D=k*η/(M*NA)  ①

式中:k為常數,約為240um;η為被檢物體與物鏡間介質的折射率;M為總放大率;NA為物鏡的數值孔徑,

由式①可知,總放大率愈高,數值孔徑值愈大,焦深愈淺。焦深與顯微照相關系密切,例如,一個用加拿大樹膠(折射率1.5)封埋的6um厚的標本,當用40×,NA為0.65物鏡和16×目鏡觀察時,按式①計算,其焦深為2.8 um,要看清這個標本的全厚度景像需要進行兩次調焦;而當用100×,NA為1.25物鏡和10×目鏡觀察時,其焦深為0.29 um,要看清這個標本的全厚度需要進行20次調焦。因此在顯微攝影中,為了加大景深,照顧到多一點的內容,有時就用NA值低、放大率小的物鏡和采用折射率較高的封藏劑。



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