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4-香豆酸:輔酶 A 連接酶酶活測定試劑盒-齊一生物

2019-6-11  閱讀(1547)

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正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義:

4CL 是連接苯丙酸途徑與木質素特異合成途徑的關鍵酶,主要催化肉桂酸生成相應的肉桂酸輔A 酯,是合成木質素與其他苯丙烷類化合物的代謝流向調控點。該酶主要存在于高等植物、酵母和菌類中,研究該酶可以探討多種生物細胞發育過程中木質素沉積的代謝機理, 為減少水果石細胞含量而提高其品質提供依據。

測定原理:

4CL 催化 4-香豆酸和 CoA 生成 4-香豆酸 CoA,在 333nm 下測 4-香豆酸 CoA 生成速率,即可反映 4CL 活性。

粗酶液提?。?/span>

細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量

104 :提取液體積mL 500~10001 的比例建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細菌或細胞冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔10s,重復30 8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

組織:按照組織質量g:提取液體積(mL) 15~10 的比例建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液,進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

測定步驟:

1、 分光光度計或酶標儀 40℃預熱 30min 以上,調節波長至 333nm,蒸餾水調零。

2、 準備 96 UV 板一塊(非普通酶標板,普通酶標板只能透過可見光,不能透過紫外光,

檢測波長小于 340nm 務必使用 UV 。

3、 樣本測定

(1) 在試劑二中加入 10mL 試劑一充分溶解混勻,置于 40℃水浴預熱 10min;現配現用

 配好后 24h 內用完;

(2) 在微量石英比色皿或 96 UV 中加入 10μL 樣本和 190μL 試劑二,混勻,立即記333nm 處初始吸光值 A1 40℃反應 30min 后的吸光值 A2,計算 ΔA=A2-A1。

齊一生物提供4-香豆酸:輔酶 A 連接酶( 4-coumarate:CoA ligase,4CL)測定試劑盒及相關代測服務,也提供木質素單體液相法代測服務,我司主要經營進口原裝Elisa試
劑盒,自產品牌QIYBIO試劑盒,種類齊全,價格實惠,凡購買我公司產品的新老客戶,可咨詢我公司! 

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