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液體樣本甘油含量試劑說明書-齊一生物試劑盒篇
液體樣本甘油含量酶法測定試劑盒
液體樣本甘油含量試劑說明書-齊一生物試劑盒篇描述：甘油是甘油三酯的水解產物。脂蛋白酯酶能夠水解血
液中的甘油三酯；胰脂酶可以水解食物中的甘油三酯；激素
敏感脂肪分解酶能夠水解脂肪細胞中的甘油三酯。 與游離脂
肪酸一樣，甘油含量是甘油三酯水解反應的可靠檢測指標，
但檢測更加方便。 本試劑盒采用甘油磷酸氧化酶法與經典的
GPO-Trinder 酶學反應方法，通過比色測定液體樣本中的甘
油含量。經過優化后，操作步驟更加簡單，檢測線性范圍在
10-1200µ mol/L，可靠性和重復性俱佳，適合生物醫學、食
品實驗室檢測。
原理： 在 ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化為 3-磷酸甘油，
再被甘油磷酸氧化酶氧化產生過氧化氫； 在過氧化物酶作用
下生色底物轉化為苯醌亞胺，其光密度值與甘油濃度成正
比。
適用范圍：測定血液、細胞培養基、體液、酒類飲料中的甘
油濃度。
組成 ：
(1) R1 試劑 40 ml
(2) R2 試劑 10 ml
(3) 4 mmol/L甘油標準品 1 ml
4 ºC，儲存 3 月。
所需設備：酶標儀、生化分析儀或 721、722 型可見光分光
光度計。工作波長 550nm，如無此波長建議優先選用
570nm、次選 530、490nm。
液體樣本甘油含量試劑說明書-齊一生物試劑盒篇一 樣本處理：
1. 酒類、飲品、清澈液體樣本：可直接進行測定，如超過
線性范圍可用蒸餾水或鹽水稀釋后再進行測定。
2. 培養液：取不含酚紅、無顏色、無血清的細胞培養基，
如有細胞碎片應 4ºC,， 12,000g 離心 5min,取上清進行測
定。
3. 血液：對于新鮮抗凝血而言，可 4ºC，2,000g離心5min
得到血漿；而對于非抗凝血來說，可先 4ºC 靜置 2h 得
到血清后，2000g離心10min,除去血細胞。將得到的血
漿/血清 70ºC 加熱 10 分鐘滅活內源脂肪酶，12,000g
離心 10min ,去上清進行測定或-20ºC 保存。
二 工作溶液配制：按4:1 比例，取 4 ml 試劑 R1 與1 ml 試
劑 R2 混合即可， 立即使用或4ºC 保存<1 天，變色棄去。
三 標準品稀釋：用蒸餾水、鹽水或與樣品緩沖液一致
的液體，將 4 mM 甘油標準品倍比稀釋為 1000、500、
250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µ mol/L，通常
取其中 4~6 管即可，注意設置0 濃度對照反應管。
四 甘油濃度測定：
1. 參見下表進行加樣。為使反應時間盡量一致，減小實驗
誤差，可先加入標準品、待測樣品，然后再加入工作溶
液。（注意：當甘油濃度較低時，可將待測樣品與工作
溶液按照 100µl:100µl 體積進行混合，然后再進行測定，
但是如果樣品體積超過 100µl時將會稀釋工作液中酶
的濃度，致使反應靈敏度下降。如果待測樣品濃度超過
線性范圍的時候，可進行適當稀釋，然后根據稀釋倍數
來計算樣品中甘油濃度。）
2. 37ºC 或25ºC 反應 10 分鐘。 反應平衡后顏色在 60 分鐘
內穩定。
3. 先用蒸餾水+工作液的空白管調零，然后測定各管 OD
值。
4. 繪制標準曲線并計算甘油濃度。
附 Excel 作圖步驟：各標準管 OD 值為 y軸，標準品濃
度為 x 軸。(1)鼠標左鍵圈住數據，點擊做圖向導，選
擇-散點圖-，點擊-完成-。(2)鼠標右鍵點圖上的某一
點，點擊-添加趨勢線-，點擊-選項-，點擊-顯示公式-
和-R2
值-。
表一：
酶標微板測定的加樣比例（檢測范圍 10-1200µmol/L）
（可對樣品和工作液比例進行微量調整）
低濃度甘油樣品測定 高濃度甘油樣品測定
空白管 標準品 樣本管 空白管 標準品 樣本管
蒸餾水 µl 50 5
標準品 µl 50 5
樣品 µl 50 5
工作液 µl 150 150 150 195 195 195
表二：
1 ml 比色杯測定的加樣比例（檢測范圍 10-1200µmol/L）
低濃度甘油樣品測定 高濃度甘油樣品測定
空白管 標準品 樣本管 空白管 標準品 樣本管
蒸餾水 µl 200 50
標準品 µl 200 50
樣品 µl 200 50
工作液 µl 600 600 600 750 750 750
說明：
1. 維生素C>0.18g/L、血紅蛋白>2g/L、膽紅素>0.25g/L、二硫
蘇糖醇、巰基乙醇、高濃度EDTA干擾測試。
2. 正常血清甘油濃度為20-130µ mol/L，細胞培養時須用不含酚
紅的無色無血清培養基，如果培養基中含有酚紅，可以選擇
含有酚紅的無細胞培養基作為對照進行測定。
