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 提 供 商 |
齊一生物科技（上海）有限公司 |  資料大小 |
23.3KB |
|---|---|---|---|
 資料類型 |
PNG 圖片 |  資料圖片 |
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 下載次數 |
92次 |
酵母細胞總蛋白提取試劑盒
試劑內容：
試劑組成 （50 次）
酵母細胞蛋白裂解液 50ml
酵母細胞漂洗液 120 ml
酵母細胞懸浮 50ml
100×蛋白酶抑制劑 0.6ml
50% 甘油 10ml
說明書 1 份
儲存條件：
本試劑在室溫干燥條件下，可保存 6 個月。酵母細胞懸浮、100×蛋白酶抑制劑和 50% 甘油 2-8℃保存。
概述：
1、總論：經典的細胞蛋白質分離流程由下述主要步驟組成：清洗組 織或細胞；裂解細胞；離心去沉淀獲得可溶性蛋白質粗提物（可依據目標蛋白質的理化特性特別的調配裂解緩沖液），目的蛋白質是膜蛋白時用去垢劑處理；通過有機溶劑或鹽析等沉淀離心、層析、電泳等方法進一步純化，得到目的產物蛋白。
2、本試劑盒用于從酵母細胞中快速、而溫和地抽提可溶性蛋白。采用本試劑處理，可以避免激烈的機械處理造成的氧化和熱度升高對目的蛋白的破壞作用。使用方便，避免了重復性差的研磨法，超聲波法或壓榨法對酵母細胞的破壞。
注意事項：請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。
1) 酵母細胞懸浮液含有高活性消解酶類，即使在30℃作用60 分鐘即可獲得滿意的溶解。但在4℃保存下。存放時間久后，可能會出現酶活性下降，因此，當出現這種情況的時候，用戶可以適當添加消解酶至10mg/ml.
2) 若目的蛋白不穩定，冰浴中孵育時間可以減少甚至取消，裂解液內加入0.2 倍體積50%甘油也可以穩定目的蛋白。
3) 4℃保存。
操作步驟：
1. 離心收集在選擇壓力下靜止培養的酵母培養物的沉淀（一般而言，12,000rpm 離心30 秒鐘，連續收集多次）酵母細胞, 按照每克酵母濕菌取用3ml 酵母細胞懸浮液的比例，于室溫將細胞懸浮起來后，然后放置于30℃保溫60-90分鐘。其間每20 分鐘顛倒混勻一次。（先懸浮起來，然后離心去除酵母細胞懸浮液）為了獲得高質量的酵母蛋白，培養酵母的時間不宜過長，一般為12-24個小 時。
由于培養的酵母菌液濃度不同,因此加入酵母細胞懸浮液后放置于37℃保溫的時間用戶可以根據實驗結果在處理的時間上進行調整,60分鐘只是一個參考值。
如果酵母細胞懸浮液不夠，也可以用濃度大于10mg/ml 的消解酶代替。
2． ．． ．離心除去酵母細胞懸浮液, 按照每克酵母細胞/5ml 酵母細胞漂洗液的比列，混懸酵母細胞樣品。
3. 離心除去酵母細胞漂洗液, 按照每克酵母細胞/5ml 酵母細胞蛋白裂解液和50ul 100× 蛋白酶抑制劑的比列，混懸酵母細胞樣品。
4．混旋或顛倒試管幾次后，20℃～37℃溫育10～20分鐘，同時輕輕搖動。
5．細胞破碎后的勻漿液，根據您不同需要可以在12 000g 離心10min 到 100 000g 離心1h 范圍離心。沉淀棄去。上清即為含有目的蛋白質的粗 提物。
