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輔酶測定試劑盒的應用原理主要基于生物化學和免疫學方法,針對不同輔酶特性采用差異化的檢測策略。以下是主要技術路線的分類闡述:
一、酶偶聯反應法
1、級聯酶促反應檢測
通過特定酶(如蘋果酸脫氫酶、檸檬酸合酶)催化輔酶參與的代謝反應,生成可定量檢測的產物。例如乙酰輔酶A的測定中,其與草酰乙酸在檸檬酸合酶作用下生成檸檬酸,同時偶聯蘋果酸脫氫酶反應生成NADH,通過檢測340 nm處NADH吸光度變化實現定量分析。
技術優勢: 高特異性,適用于動態監測代謝過程中的輔酶水平。
2、硫酯酶-顯色體系聯用
部分試劑盒(如AkrivisBio產品)利用乙酰輔酶A特異性硫酯酶分解目標分子釋放硫基,結合熒光增強底物(如DTNB替代物),通過熒光強度變化提升檢測靈敏度(較傳統方法提高5倍)。
二、免疫學檢測法(ELISA)
1、雙抗體夾心法
采用包被抗體捕獲樣本中的輔酶(如小鼠A-CoA),再加入酶標記二抗形成復合物,通過底物(如TMB)顯色反應,顏色深度與輔酶濃度正相關。此方法適用于復雜生物樣本中的痕量檢測。
2、抗原-抗體-酶標系統
如NAD+檢測中,微孔板預包被特異性抗體捕獲目標分子,引入酶標記二抗催化底物顯色,實現間接定量。巴豆酰輔酶A檢測同理,利用抗體特異性結合與酶聯放大信號。
三、跨平臺技術優化
1、靈敏度提升:通過熒光底物(如MA-0127試劑盒)或基質凈化技術,檢測限可達皮摩爾級,覆蓋全物種樣本。
2、高效檢測:部分方案實現15分鐘內完成樣本處理與檢測,顯著提升實驗效率。
3、廣譜兼容性:適配細胞裂解液、動植物組織及體液樣本,滿足多樣化研究需求。
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