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腫瘤標志物聯合檢測法在早期發現、病程監控、機制研究、腫瘤轉移及預后監測中應用
世界衛生組織作出性結論，癌癥患者如能早期發現，*可達80%以上。腫瘤標志物可以比影像學更早的發現腫瘤，因而對于治療癌癥意義深遠。腫瘤標志物的分泌來源于腫瘤微環境的基質細胞以及腫瘤細胞，存在于細胞、組織或體液中，能用化學或免疫方法定量證實腫瘤存在，監測腫瘤治療和預后的物質。
圖1：常見腫瘤標志物聯合檢測方案
目前為止，還沒有找到靈敏度、特異性100%的腫瘤標志物。單一指標、單一因子的檢測很難準確的實現腫瘤早期檢測、病程監控及預后治療效果的評估等。如傳統的Elisa方法，僅能進行單一蛋白因子的檢測。若要提高檢測的準確性和特異性，需要進行多個Elisa實驗檢測不同的蛋白因子。以10個蛋白因子檢測為例，需要10個Elisa試劑盒，至少1ml的樣本，一周時間才能得到結果。無論從人力、財力還是時間和樣本量來說，都不是很好的選擇。而且10個因子不是同時檢測也可能造成結果的誤差。
圖2 檢測對象越豐富疾病區分度越好（class代表指標分類，marker代表具體指標）
目前，實現腫瘤標志物聯合檢測的zui便捷zui的技術手段之一就是xMAP技術。xMAP技術基于不同熒光編碼的微珠。每一種編碼微珠標記一種可捕獲相應目標分子的抗體，根據檢測靶標的數量，選擇1-100種標記的微珠，混合后與樣品中待測的靶標分子作用，然后在液流驅動下逐個通過檢測窗口，兩束不同波長激光對每個微球進行檢測，635nm激光檢測微球的色標編碼從而確定檢測的靶標，532nm激光檢測相應靶標上的熒光標記進行定量，通過計算機分析和標準曲線擬合，直接對每一種目標分子進行定量。該技術利用Luminex多功能液相芯片平臺實現了對蛋白、核酸等靶標分子的多重檢測，是*被納入美國臨床實驗室質控的高通量技術，被譽為真正的臨床型生物芯片。
圖3 xMAP技術原理圖
基于xMAP技術的多重檢測平臺的優勢：
- 多重檢測：實現1-500重因子同時檢測，為微量樣本的檢測提供技術保障；
- 高靈敏度：精密的光學設計提升檢測靈敏度，可低至0.04pg/ml；
- 快速/高通量：96/384孔板自動化高通量檢測，每小時數據量可達9,600個結果；
- 微量樣本：僅需10-50ul的樣本量使得跟蹤動物模型的階段性變化成為可能，避免個體差異帶來的實驗誤差。
目前，已有幾千篇文獻報道利用xMAP技術進行腫瘤標志物聯合檢測以提高腫瘤檢查準確性和特異性。例如，Irene等人采用非侵入性方法（血清）對卵巢癌6個標志物進行檢測，發現6個標志物聯合診斷比原來的單個CA-125檢測準確率明顯提升（95.3% vs 72%）,從而能夠展開卵巢癌的早期治療（圖2）。
圖4：Irene等人卵巢癌早期檢測研究已發表于Clinic Cancer Research(IF: 8.19)
作為Luminex zui早的合作伙伴，Merck提供包括Luminex儀器、Milliplex高通量多因子檢測試劑盒、Milliplex Analyst 軟件和Biomarker service在內的一整套高通量多因子檢測平臺。Merck始終致力于生物標志物多重檢測技術與研發，擁有三十多年的研發和服務經驗。目前可以提供8個種屬超過1200個蛋白因子的檢測，涉及免疫、代謝、腫瘤、神經、信號通路、干細胞等多個熱門研究領域，能夠滿足多數腫瘤標志物開發與診斷需求。此外，Merck已與全國各地腫瘤醫院與研究所合作，提供檢測平臺和服務，積累了二十年檢測與分析的經驗，因此開設腫瘤標志物聯合檢測法應用專題，分享成功經驗給廣大臨床及診斷研究工作者。
