研發和生產中，提到內毒素，腦袋里冒出的第一個想法是不是 “難纏的對手”？那么，如何給予“對手”強有效的致命一擊呢？別急，咱們接著聊。
內毒素(Endotoxin)是復雜的脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)，構成所有革蘭氏陰性菌外細胞壁的固有部分，并負責細胞壁的組織和穩定性。它們由三個不同的區域組成：菌體特異性多糖、非特異性核心多糖和脂質A。其中，脂質A是其主要的毒性成分。
在細菌細胞死亡溶解或用人工手段破壞了細菌細胞結構后，內毒素會被釋放出來，對宿主造成毒性作用。對于內毒素引起的毒性反應，主要有發熱反應、多器官功能衰竭、感染性休克、敗血癥、腦膜炎球菌血癥等。
內毒素單體分子量約10KD左右，在不同成分的水溶液中，可形成大分子聚合體，最大可以超過1000 KD。內毒素對熱有很強耐受性，只有160℃以上的高溫持續2~4 h，或者采用強酸、強堿、強氧化劑加熱煮沸30 min以上才能破壞其生物活性。
由于內毒素的危害性，中國藥典和美國藥典對于內毒素的檢查和要求都做了明確規定：在研發和生產過程中，除了確保無菌操作及所有與料液有接觸的設備、耗材、試劑等均無引入外源性內毒素污染風險的同時，采取必要且有效的工藝手段或工藝方法，降低或去除內源性內毒素污染，達到工藝要求，提高產品安全性。
去除內毒素有多種工藝方法，層析技術目前也是從成本和有效性上比較突出的方法之一。利用內毒素分子的不同性質，可以采用不同原理的層析方法，其中，本文重點展示了層析方法中的離子交換層析法。
內毒素含有脂質A，而脂質A中含有多個磷酸根結構，等電點比較低，通常是3.1。當溶液pH值高于其等電點時，內毒素帶有部分的負電荷，可以結合帶正電的陰離子交換層析介質。因此，可以利用強陰離子交換層析介質結合內毒素，目標蛋白流穿的方式去除內毒素。
其中，百林科可以提供不同的強陰離子交換層析介質的選擇，如MaXtar Q、MaXtar Q HR、MaXtar Q HR XL、Q Chromstar BB、Q Chromstar FF、Q Chromstar HP、Q Chromstar XL、Q Chromstar BB XL等，根據不同的工藝要求，可以選擇不同的層析介質。
MaXtar Q HR參數介紹
* 動態載量的測量條件：
裝柱高度：10 cm，測試流速150 cm/h ，測試緩沖液：0.05 M 乙酸鈉溶液，pH4.75，測試樣品：6 mg/ml 的BSA 樣品，當BSA 的穿透量達到10% 時，單位介質體積(ml) 的BSA 上樣量(mg)。
** 工作范圍:
在該pH值范圍內，介質的功能不發生明顯變化。
*** v/v：體積比
應用案例：
質粒純化中使用MaXtar Q HR去除內毒素
? 層析柱：Chrom-Screen MaXtar Q HR 4.7ml；10 cm
? 上樣：親和純化后質粒樣品(保留時間：5 min)
? 平衡液：0.4M NaCl，10mM EDTA，100mM Tris-HCl，pH 7.5
? 洗脫液：1.0M NaCl，10mM EDTA，100mM Tris-HCl，pH 7.5
MaXtar Q HR層析圖譜
小結：經MaXtar Q HR填料純化后，內毒素含量<5EU/mg，符合內毒素控制的質量要求。
歡迎掃碼申請，大量層析產品均可試用哦！
參考文獻 1. Kim, S.E., Su, W., Cho, M., Lee, Y., Choe, W.S., 2012. Anal Biochem. 424, 1, 12-20.
2. Su, W., Lin, M., Lee, H., Cho, M., Choe, W., Lee, Y., 2012. Biosensors and Bioelectronics. 32, 32-36.
3. Ding, S., Chang, B., Wu, C., Chen, C., Chang, H., 2007. Electrochem. Commun. 9, 5, 1206–1211.
4. Gutsmann, T., Howe, J., Zahringer, U., Garidel, P., Schromm, A.B., Koch, M.H., Fujimoto, Y., Fukase, K., Moriyon, I., Martinez-de-Tejada, G., Brandenburg, K., 2010. Innate Immun. 16, 39–47.
5. 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：三部[M]. 北京：中國醫藥科技出版社，2020：42-48.
手機版
制藥網手機版
制藥網小程序
官方微信
公眾號：zyzhan
預告 
預告 
預告 
