摘要 目的：建立以薄層掃描法測定黃皮酰胺含量的方法。方法：固定相系以硅膠G過240目篩）加0.5％CMC-Na（1：2.5）所制備的薄層板，展開劑為氯仿-甲醇（85：15），檢測波長為λ=259 nm；掃描方式為單波長反射法鋸齒掃描，光源氘燈，線性參數Sx=3，振幅為l0，背景校正：結果：此法測得黃皮酰胺含量的平均回收率為97.78％ ，RSD為0.36％ ；其在5.3～53μg／mL范圍內濃度與峰面積線性關系良好（r=0.99l9）。結論：用薄層掃描法測定黃皮酰胺的含量，準確度高，重現性好，適合于快速檢驗。
    關鍵詞：黃皮酰胺；薄層掃描法；含量測定
    黃皮酰胺（elausenamide，clau）是蕓香科黃皮屬植物黃皮Clausena Lamium（Lour．）Skeels葉水浸膏分離得到的有效成分，經不對稱合成和拆合得到左旋和右旋黃皮酰胺。其中左旋黃皮酰胺為活性成分，具有多方面的藥理作用。早期藥理實驗表明其對四氯化碳引起的小鼠谷丙轉氨酶的升高有明顯的降低作用。藥效學研究提示，左旋黃皮酰胺可促進突觸體谷氨酸釋放，增加大鼠皮層厚度和海馬CA1區數及NMDA受體密度，提高小鼠腦皮層和海馬的膽堿乙酰轉移酶活性 并對抗樟柳堿引起的乙酰膽堿含量的降低；細胞外生理研究證明，左旋黃皮酰胺可增強大鼠海馬齒狀回顆粒細胞層有低頻刺激所誘發的群峰電位和由強刺激誘發的。這些結果表明，左旋黃皮酰胺有促智作用，有望開發成為抗老年癡呆病的新藥。筆者通過文獻報道的方法及黃皮酰胺的結構特點，確定了實驗條件，建立了薄層掃描法（TLCS法）測定黃皮酰胺的含量，為控制黃皮酰胺的質量提供了實驗依據。
    1 儀器和材料
    儀器：CS-9000型雙波長薄層掃描儀（日本島津）；939薄層鋪板器（重慶南岸貝爾德儀器技術廠）；定量毛細管（美國Drummonp公司）。
    材料：黃皮酰胺粗品、黃皮酰胺一次甲醇提取物、黃皮酰胺二次甲醇提取物及對照品均由中國醫學科學院藥理研究所提供。硅膠G（青島海洋化工廠），所用試劑均為分析純。
    2 方法與結果
    2．1 對照品溶液及標準曲線的制備
    精密稱取黃皮酰胺對照品0.53mg，置5mLmL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得濃度為1.06mg／mL的對照品溶液。分別精密吸取對照品溶液5，l0，20，30，50μL，按層析條件點樣，展開，掃描測定其峰面積，以點樣量為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線，回歸方程為Y=503.26 一42.2l，r=0.99l 9，線性范圍為5.3～53μg／mL。
    掃描條件及有關參數的確定：將對照品斑點在200～370nm波長范圍內進行光譜掃描，其zui大吸收波長為259 nm，確定測定波長λ=259nm。掃描方式：單波長反射法鋸齒掃描，光源氘燈，線性參數為Sx=3，振幅為l0，背景校正。
    2 2 樣品溶液的制備
    分別精密稱取黃皮酰胺粗品、黃皮酰胺一次甲醇提取物、黃皮酰胺二次甲醇提取物1.02，1.02，1.06 mg，置10 mL量瓶中，分別加甲醇溶解，超聲振蕩30min，過濾，再加甲醇稀釋至刻度，搖勻即得。
    2，3 層析條件及方法
    取硅膠G（過240目篩）加0.5％CMC-Na（1：2.5）混合，研磨混勻超聲除去氣泡后，用自動鋪板器鋪板，規格10cm×20 cm，厚度為0.6mm。室溫晾干，于105℃活化0.5h，置干燥器內備用。展開劑為置冰箱過夜的氯仿一甲醇（85：l5）的下層溶液，顯色劑為碘化鉍鉀：碘-碘化鉀（1：1）。
    在同一薄層板上，分別點黃皮酰胺粗品、黃皮酰胺一次甲醇提取物、黃皮酰胺二次甲醇提取物樣品溶液及黃皮酰胺對照品溶液各50μL，在上述層析條件下進行展開，展距為12.0cm，取出晾干，噴以顯色劑，自然陰干，于可見光下觀察結果，可見樣品溶液在相同Rf=0.76處分別與對照品溶液均有相同的棕紅色斑點。
    2，4 樣品含量測定
    分別精密吸取黃皮酰胺粗品、黃皮酰胺一次甲醇提取物、黃皮酰胺二次甲醇提取物樣品溶液各20μL，點于同一薄層板上，展開定位后測定其峰面積，按標準曲線計算。結果黃皮酰胺粗品含量為（34.70±l.79）％ ，一次甲醇提取物含量為（47.55±1.91）％ ，二次甲醇提取物含量為（83.28±2.61）％ 。
    2 5 回收率試驗
    分別精密吸取已知含量的黃皮酰胺二次甲醇提取物溶液3份各20μL，點于同一薄層板上，同時分別精密加入對照品溶液l0，20，30μL，展開定位后掃描測定。
    2．6 精密度試驗
    精密吸取對照品溶液20μL，點于薄層板上，展開定位后，連續掃描5次。結果各次測得峰面積的RSD為1.16％（n=5）。
    2 7 穩定性試驗
    精密吸取對照品溶液20μL，點樣，展開，定位，掃描測定峰面積，從15 min起測定，每隔30min測定1次，直至2h。結果對照品溶液在2h內基本穩定，RSD為1.7l％。
    3 討論
    3 1 試驗中采用薄層色譜法，所用展開劑系統是經過多次選擇確定的，所展出的斑點基本無拖尾， 適當，穩定性好，利于掃描測定。
    3 2 從方法的精密度和線性關系考察及加樣回收試驗的結果來看，樣品在點樣范圍內，濃度與峰面積呈線性關系。TLCS法重現性、準確度好。
參考文獻：
【1】楊明河，曹延懷，李偉勛，等，黃皮葉中黃皮酰胺的分離和結構測定【J】藥學學報，1987，22（1）：33—40
【2】饒爾昌，程家寵，楊光中，等，黃皮酰胺的合成【J】，藥學學報，1994，29：502，