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DNA純化柱,這一神秘工具如何在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中大顯身手?
DNA純化柱是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的得力助手,專門用于分離和純化DNA分子。它通常由離心管和吸附柱兩部分組成,吸附柱上涂有硅膠或磁珠等特定吸附材料,能夠與DNA分子發(fā)生特異性結(jié)合。在高鹽濃度下,DNA被吸附到這些材料上,而雜質(zhì)則被清洗掉。完成純化后,通過適當(dāng)?shù)南疵摼彌_液,純化的DNA就能從吸附材料上被釋放出來。
DNA純化柱的應(yīng)用廣泛,不僅可以用于質(zhì)粒DNA提取、基因組DNA提取,還能快速純化PCR產(chǎn)物,甚至從瓊脂糖凝膠中恢復(fù)DNA鏈。它的結(jié)合能力強(qiáng),能處理片段大小從65bp到10kbp的DNA,兼容多種緩沖液配方,適用于質(zhì)粒小量制備、凝膠萃取和PCR清除等多種場(chǎng)景。
以下是關(guān)于DNA純化柱的詳細(xì)說明:
一、基本定義
DNA純化柱是一種基于硅膠膜或玻璃纖維膜吸附原理的核酸提取工具,主要用于從復(fù)雜樣本中分離純化DNA/RNA。其核心組件包括離心管、硅膠膜/玻璃纖維膜和純化柱結(jié)構(gòu)。
二、技術(shù)原理
吸附機(jī)制
在高鹽條件下,DNA會(huì)選擇性吸附于硅膠膜/玻璃纖維膜表面
該吸附過程可逆,低鹽緩沖液可洗脫DNA
分離過程
裂解樣本→結(jié)合DNA→洗滌雜質(zhì)→洗脫DNA
通過離心力驅(qū)動(dòng)液體通過膜結(jié)構(gòu)
三、主要結(jié)構(gòu)
組件 功能特性
硅膠膜 核心吸附介質(zhì),孔徑0.45-2μm
離心管 承受離心力,收集洗脫液
制備管 連接離心管與純化柱
四、性能參數(shù)
結(jié)合能力:?jiǎn)沃晌?5-50μg DNA
片段范圍:有效提取65bp-10kbp片段
兼容性:適配Qiagen/Invitrogen等品牌緩沖液
五、應(yīng)用場(chǎng)景
分子生物學(xué)
PCR產(chǎn)物純化
質(zhì)粒/基因組DNA提取
診斷檢測(cè)
臨床樣本核酸分離
環(huán)境污染物DNA檢測(cè)
六、技術(shù)優(yōu)勢(shì)
操作簡(jiǎn)便(15分鐘內(nèi)完成)
純度較高(可去除99%蛋白雜質(zhì))
適用于微量樣本處理
(注:特殊型號(hào)如GE NAP柱采用Sephadex G-25填料,專用于寡核苷酸純化)
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