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人中性粒細胞彈性蛋白酶(NE)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

來源:齊一生物科技(上海)有限公司   2019年01月04日 11:34  

本試劑僅供研究使用 目的:本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關液體樣本中中性粒細胞彈性蛋白酶(NE)含量。
實驗原理:
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人中性粒細胞彈性蛋白酶(NE)水平。用純化的人中性粒細胞彈性蛋白酶(NE)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入中性粒細胞彈性蛋白酶(NE),再與 HRP 標記的中性粒細胞彈性蛋白酶(NE)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的中性粒細胞彈性蛋白酶(NE)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中人中性粒細胞彈性蛋白酶(NE)濃度。

樣本處理及要求:
1.血清:室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。
2.血漿:應根據標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
3.尿液:用無菌管收集,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4.細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用 PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到 100 萬/ml 左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
7.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

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