小鼠試劑盒操作需嚴格遵循說明書。首先，將試劑盒和所有試劑恢復至室溫，準備好移液器、試管、酶標板等器材。接著，從冰箱中取出包被板，室溫平衡30分鐘后，加入預稀釋的抗體或標準品，在室溫或特定溫度下孵育使抗體與包被板充分結合。然后，洗滌去除未結合的抗體，加入待測樣品和檢測抗體、酶結合抗體進行孵育。在加入底物液后，避光孵育使酶催化底物反應，產生顏色變化。最后，加入終止液終止反應，用酶標儀讀取各孔的吸光度值，根據標準曲線計算樣品中目標蛋白的濃度。
整個操作過程中，要特別注意防止交叉污染，保持實驗環境的清潔和穩定。部分試劑盒中的試劑有低毒，需在安全柜內操作。操作時還需注意避光，以免影響試劑活性。