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吉首市中誠制藥機械廠
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止喘膠囊系我院根據(jù)吳銀根教授的經(jīng)驗方所制定的自制制劑。本方主要有淫羊藿和蛇床子等藥味組成，具有補脾腎、祛痰濕作用，用于治療慢性支氣管炎、肺氣腫、緩解期的支氣管哮喘等疾病。本方原為湯劑，在我院已有500 余例臨床觀察。為便于服用和攜帶方便，將該方制成膠囊。本研究擬采用正交設(shè)計方法，以方中有效成分淫羊藿苷作為考核指標(biāo)，對其提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。
1 儀器與試藥
1.1 儀器日本島津公司SHIMADZU 液相色譜儀，LC- 10ATVP 泵，CTO- 10ASVP 柱溫箱，SCL- 10AVP系統(tǒng)控制器，SPD-M10AVP 檢測器，UV- 2450 分光光度計，BS- 110 型分析天平，Kromasil 柱。
1.2 試藥甲醇為色譜純試劑，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。使用前所有試劑均經(jīng)過孔徑0.45μm的微孔濾膜濾過；所用藥材均購于上海徐匯中藥飲片廠，并經(jīng)上海市藥檢所吳趙云教授鑒定。淫羊藿為小檗科（Berberidaceae）柔毛淫羊藿的全草。對照品淫羊藿苷由中國藥品生物制品檢定所提供（批號：0737 -200117）。
2 試驗方法
2.1 色譜條件色譜柱: Kromasil C18（250 mm×4.6mm，5 μm）；檢測波長為270 nm；柱溫:35℃。溶劑系統(tǒng)：采用甲醇- 1.25%醋酸溶劑系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫。流動相：0.00~14.00 min 時，醋酸水（0.5 ∶39.5）∶甲醇= 43 ∶57；14.01~25.00 min 時，醋酸水（0.5 ∶39.5）∶甲醇=57 ∶43，流速均為1.0 ml/min。
2.2 對照品溶液的制備精密稱取淫羊藿苷對照品于棕色量瓶中，用甲醇配制成濃度為0.1140 μg/μl 的淫羊藿苷對照品溶液。
2.3 樣品溶液的制備正交設(shè)計實驗所得到的浸膏適量，用甲醇溶解、稀釋、濾過，再用甲醇配制成一定濃度的樣品溶液。
2.4 淫羊藿陰性樣品的制備取組方中缺淫羊藿的其他藥材，按提取淫羊藿苷的*工藝（A2B1C2）方法制備成淫羊藿陰性樣品溶液。
2.5 淫羊藿苷含量測定參照藥典及有關(guān)文獻(xiàn)[1～3]，分別吸去上述陰性樣品溶液、對照溶液、樣品溶液20μl，注入液相色譜儀，記錄峰面積，計算樣品中淫羊霍苷含量。
2.6 正交試驗方案提取淫羊藿苷的方法采用傳統(tǒng)的水煎法：提取，過濾，合并濾液，濃縮，真空干燥得粉末，計算浸膏得率，并測定淫羊霍苷含量。選擇煎煮次數(shù)、煎煮時間及加水量為三因素，進(jìn)行三因素三水平L9（34）正交試驗，以浸膏得率和淫羊霍苷含量為指標(biāo)，優(yōu)選提取工藝。
2.7 驗證試驗采用正交試驗結(jié)果所得*提取工藝，進(jìn)行3 批驗證實驗。
3 結(jié)果
3.1 各組淫羊霍苷HPLC 色譜圖比較結(jié)果表明，該方法專屬性良好，陰性對照無干擾。
3.2 正交試驗結(jié)果結(jié)合方差分析和干浸膏得率實驗結(jié)果，表明煎煮次數(shù)對提取效果有極顯著影響，煎煮時間和加水量無顯著影響。*提取工藝為：A2B1C2，即加10 倍量的水，煎煮2 次，每次0.5 h. 3.3 驗證實驗驗證實驗結(jié)果表明，所選提取工藝條件穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，為*提取工藝. 4 討論本研究對組方中有效成分淫羊藿苷和蛇床子素分別采用了不同溶劑系統(tǒng)和不同提取方法，正交試驗結(jié)果表明，提取淫羊藿苷的優(yōu)化工藝條件為：加10 倍量的水，煎煮2 次，每次0.5 h。本研究采用二極陣列管檢測器（DAD）測定淫羊藿苷含量，方法簡單易行。本制劑的提取方法由于同時采用了水提取法和醇提法工藝，雖較復(fù)雜，但它zui大限度地提取了藥物的有效成分，在保證療效方面比單一提取法好。本制劑的成型工藝以及制劑中有效成分含量的測定將另文報道。
