定氮儀的應用原理
2021-01-08標簽:消化管, 定氮儀, 中
定氮儀檢測樣品蛋白質含量分為以下步驟:
第一步:消化/消解(將有機物樣品轉化為無機物)
1、準備消化管(根據消解儀的工位數來定),標號。1、2、3號消化管中分別加入適當濃度的蛋白溶液1.0mL,樣品要加到消化管底部,切勿沾在瓶口及瓶頸上。再依次加入硫酸鉀硫酸銅<接觸劑0.3g,濃硫酸2.0mL,30%過氧化氫1.0mL。4、5、6號燒瓶作為空白對照,用以測定試劑中可能含有的微量含氮物質,對樣品測定進行校正。4、5、6號消化管中加入蒸餾水1.0mL代替樣液,其余所加試劑與1、2、3號燒瓶相同。
2、將加好試劑的各消化管放置消化架上,接好抽氣裝置。用控溫方式分段加熱,此時消化管內物質炭化變黑,并產生大量泡沫,務必注意防止氣泡沖出管口。待泡沫消失停止產生后,加大火力,保持消化管內液體微沸,至溶液澄清后,再繼續加熱使消化液微沸15min。消化時放出的氣體內含SO2,具有強烈刺激性,因此自始自終應打開抽水泵將氣體抽入自來水排出。整個消化過程均應在通風櫥中進行。消化完全后,關閉加熱裝置,使消化管冷卻至室溫。
第二步:蒸餾和吸收蒸餾和吸收是在微量定氮儀內完成。
蒸餾這個動作也是非常關鍵的,加熱蒸餾的過程中,加酸、加堿、加稀釋液目前市場上都是自動完成的,特備注意的是堿液一定要過量,原因是堿液與消解后的樣品酸液完全反應,否則測試數據是不正確的。
第三步:滴定,蒸餾收集結束后,就是滴定。
方法有兩種:
1、是用半自動定氮儀,手動滴定,肉眼觀察滴定的終點顏色的變化,確定滴定完成,計算出氮含量,然后通過樣品的轉化系數,求取蛋白質樣品的含量。
2、全自動定氮儀,通過光學顏色傳感技術,定氮儀邊蒸餾邊滴定的方式,自動計算結果,打印結果。
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